Colletotrichum fioriniae prouzrokovač antraknoze plodova kruške

Abstract

Kruška (Pyrus communis L.) je jedna od najstarijih i najrasprostranjenijih voćarskih kultura. Plodovi kruške su izrazito bogati nutrijentima i niskog glikemijskog indeksa, pa se preporučuju u ishrani svih kategorija stanovništva. U periodu vegetacije i nakon berbe propadanje plodova kruške mogu izazvati brojni biljni patogeni, među kojima su i gljive roda Colletotricum. Tokom jeseni 2021. godine iz skladišta u okolini Smedereva sakupljeni su plodovi kruške (cv. Santa Maria) sa simptomima antraknoze. Na površini svih inficiranih plodova bile su prisutne tamne, kružne, udubljene nekrotične lezije sa koncentrično raspoređenim acervulima i narandžastom konidijalnom masom. Izolacija patogena je obavljena standarnim fitopatološkim metodama na podlozi od krompir-dekstroznog agara (KDA). Svi dobijeni izolati su nakon 7 dana na KDA i temperaturi od 25⁰C ispoljili uniformne morfološke osobine. Formirane kolonije su bile svetlosive do svetloružičaste, sa naličja tamnoružičaste do vinastocrvene boje. Prosečan porast kolonija je iznosio 64±2 mm. Konidije su bile hijalinske, fuziformne, neseptirane, glatkih zidova, sa oba zaoštrena kraja, veličine 12,8 - 16,6 × 3,5 – 4,4 µm (n=100); a apresorije pojedinačne, tamnobraon boje, okrugle do nepravilnog oblika, glatkih zidova, veličine 5,5 – 9,6 × 4,8 – 7,2 µm (n=20). Morfološke karakteristike izolata su odgovarale literaturnom opisu C. acutatum species complex. Molekularna identifikacija reprezentativnog izolata SZ-21-36 je obavljena na osnovu ITS regiona rDNA korišćenjem prajmera ITS1/ITS4; dela gena za beta tubulin (Ben A) primenom prajmera Bt2a/Bt2b; gliceraldehid 3 - fosfat dehidrogenaze (GAPDH) sa prajmerima GDF1/GDR1, i dela aktin gena (ACT) upotrebom prajmera ACT512F/ACT783R. Dobijeni PCR produkti su sekvencirani, a nukleotidne sekvence deponovane u GenBank bazi podataka. BLAST analizom je utvrđeno da su sekvence ON171625 (ITS) i ON186698 (ACT) 99% slične, a sekvence ON186696 (BenA) i ON186697 (GAPDH) identične sa sekvencama istih regiona izolata vrste C. fioriniae deponovanih u GenBank bazi. Multilokus filogenetska analiza zasnovana na navedenim molekularnim markerima je potvrdila rezultate BLAST-a, i svrstala izolat SZ-21-36 sa ostalim izolatima C. fioriniae iz GenBank baze podataka (100% bootstrap podrška). Provera patogenosti izolata obavljena je inokulacijom sa 50 μl suspenzije spora (1 × 106 konidija/ml) u prethodno napravljene povrede na zdravim plodovima kruške (cv. Santa Maria). Kontrolni plodovi su inokulisani sterilnom destilovanom vodom. Nakon 10 dana inkubacije u vlažnoj komori na 25°C na svim inokulisanim plodovima kruške razvili su se tipični simptomi antraknoze, dok su kontrolni plodovi bili bez simptoma. Kulture dobijene reizolacijom bile su istih morfoloških karakteristika čime je potvrđena patogenost testiranih izolata. U ovom istraživanju je konvencionalnim i molekularnim metodama prvi put u Srbiji identifikovana vrsta C. fioriniae - prouzrokovač antraknoze plodova kruške.